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ELISA實(shí)驗(yàn)的不同方法類型和操作步驟
酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)根據(jù)檢測(cè)原理和設(shè)計(jì)差異，可分為?直接ELISA、間接ELISA、夾心ELISA和競(jìng)爭(zhēng)ELISA?四種類型，每種方法在靈敏度、適用場(chǎng)景和操作步驟上存在顯著差異?。
一、ELISA實(shí)驗(yàn)類型及原理?
直接ELISA?
原理?：抗原直接包被于固相載體(如96孔板)，加入酶標(biāo)記的一抗結(jié)合后顯色?。
特點(diǎn)?：步驟簡(jiǎn)單，但靈敏度較低(1-10 ng/mL)，適用于高豐度抗原檢測(cè)(如病毒顆粒)?。
間接ELISA?
原理
抗原包被后，先加一抗，再通過酶標(biāo)二抗放大信號(hào)?。
特點(diǎn)?：靈敏度提升5-10倍(0.1-1 ng/mL)，常用于抗體檢測(cè)(如HIV篩查)?。
夾心ELISA?
原理?：雙抗體夾心結(jié)構(gòu)(捕獲抗體+檢測(cè)抗體)，適用于大分子抗原(如細(xì)胞因子)?。
特點(diǎn)?：靈敏度最高(0.01-0.1 ng/mL)，可排除復(fù)雜樣本干擾?。
競(jìng)爭(zhēng)ELISA?
原理?：樣本抗原與標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體，信號(hào)強(qiáng)度與抗原濃度成反比?。
特點(diǎn)?：適用于小分子，靈敏度達(dá)0.001-0.01 ng/mL?。
二、通用操作步驟?
所有ELISA實(shí)驗(yàn)均遵循以下核心流程(以?shī)A心ELISA為例)：
包被?：將捕獲抗體吸附于固相載體(4℃過夜或37℃ 2小時(shí))?。
封閉?：加入封閉液(如BSA)阻斷非特異性結(jié)合(37℃ 1小時(shí))?。
孵育?：
加入樣本抗原(室溫孵育1-2小時(shí))?。
洗滌后加入酶標(biāo)檢測(cè)抗體(室溫孵育1小時(shí))?。
顯色?：加入底物(如TMB)，避光反應(yīng)10-30分鐘?。
終止與檢測(cè)?：加入終止液(如2M H?SO?)，用酶標(biāo)儀讀取450nm吸光度?。
三、方法選擇建議?
類型 適用目標(biāo) 推薦場(chǎng)景
直接ELISA 高豐度抗原 病毒檢測(cè)、純化蛋白定量?
間接ELISA 抗體 傳染病診斷、疫苗評(píng)估?
夾心ELISA 微量蛋白 細(xì)胞因子、腫瘤標(biāo)志物?
競(jìng)爭(zhēng)ELISA 小分子(激素/藥物) 藥物監(jiān)測(cè)、過敏原檢測(cè)?
四、常見問題與優(yōu)化?
靈敏度不足?：夾心法通過雙抗體結(jié)合可提升信號(hào)?。
背景高?：優(yōu)化封閉條件(如5%脫脂奶粉)或增加洗滌次數(shù)?。
交叉反應(yīng)?：競(jìng)爭(zhēng)法可減少小分子檢測(cè)干擾?。
注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說(shuō)明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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